Zastosowanie biochemicznych wskaźników związanych z przemianą białka w ustroju do oceny wartości biologicznej białka żywności
Ponieważ uprzednio opisane metody bilansowe są pracochłonne i niewygodne dla osób poddających się badaniom, wykonano szereg prób w poszukiwaniu metod dogodniejszych a możliwych do zastosowania u ludzi. Wyniki badań różnych autorów wskazują, że niektóre biochemiczne wskaźniki mogłyby służyć jako pośrednie parametry określania wartości biologicznej białek bezpośrednio na człowieka, jak również stanowią one wskaźniki pokrycia zapotrzebowania na białko. Rozważa się tu takie testy jak: poziom wolnych aminokwasów i mocznika w surowicy krwi, poziom mocznika czy zawartość siarczanów w moczu. Jedną z tych prób jest powiązanie poziomu wolnych aminokwasów w osoczu lub surowicy krwi po obciążeniu wysokobiałkowym posiłkiem, z jakością tego białka (Mc Laughlan 1963, Morrison 1961, Hill. i Olsen 1963, Smith i Scott 1965, Longenecker i Hause 1959, Gray i wsp. 1960).
Wykazano przy tym również, że znaczny wpływ na poziom i wzajemne stosunki aminokwasów we krwi po spożyciu badanego białka, posiada okres poprzedzający doświadczenie; poziom białka w diecie spożywanej w tym okresie, czas głodzenia przed podaniem posiłku obciążającego, składniki pozabiałkowe diety.
Różnicę poziomów aminokwasów oznaczonych w surowicy krwi po podaniu posiłku obciążającego oraz przed podaniem tego posiłku (po okresie kilkugodzinnego głodzenia) w stosunku do wysokości zapotrzebowania na te aminokwasy, ... czytaj dalej
Badanie bilansu azotowego przy zastosowaniu kilku poziomów białka
Najdokładniejsze wyniki oceny wartości biologicznej białka zarówno u człowieka, jak i zwierząt laboratoryjnych daje metoda, w której białko jest podawane na kilku poziomach, przy niskim jego spożyciu. Wymaga to prowadzenia badań bilansu azotowego przy co najmniej 3 okresach na tych samych osobach, przy czym spożycie białka powinno wahać się od 10 g na dobę do ok. 30-35 g. Przy tak niskim spożyciu osiąga się najwyższą korelację wyników pomiędzy zawartością aminokwasu ograniczającego a retencją azotu. W tych warunkach badań Kies i Fox (1970) zarejestrowały nawet niewielkie różnice w zawartości i przyswajalności aminokwasów egzogennych. Na przykład w tablicy 14 są podane wyniki badania biologicznej wartości białka zboża Triticale w porównaniu do wyjściowej odmiany pszenicy wykonane przez Kies i Fox (1970) na podstawie badania bilansu azotowego u dorosłych mężczyzn. ... czytaj dalej
Oznaczanie bilansu azotowego
Oznaczenie bilansu azotowego polega na dokładnych pomiarach ilości spożytego białka (azotu) z produktu badanego, który wg Kies i Fox (1975) powinien-stanowić nie mniej niż 80% całkowitej ilości azotu całodziennej racji, a następnie ilość wydalonego azotu w moczu i kale. Początek i koniec doświadczenia znakuje się przez podanie niewchłanianego barwnika (np. węgiel aktywny lub karmin indygo), w ten sposób uzyskuje się pewność, że zbierany kał pochodzi z niestrawionych części diety doświadczalnej. W doborze osób do doświadczenia powinno się brać pod uwagę bezwzględną uczciwość i chęć współdziałania w przeprowadzanych badaniach, którą obserwuje się w okresie wstępnym doświadczenia. W tym okresie należy podać w ciągu 2 tygodni dietę o obniżonej zawartości białka, w celu przystosowania bilansu azotowego do następnych warunków doświadczenia właściwego lub zastosować dietę bezbiałkową, w celu oznaczenia azotu metabolicznego kału, oraz azotu endogennego moczu. Na ogół korzysta się z danych przeciętnych, cytowanych w rozdz. 2, ponieważ oznaczenia na diecie bezbiałkowej u ludzi stosuje się rzadko ze względów etycznych.
Z wieloletnich prac Kies i Fox (1975) wynika, że badania prowadzone w systemie otwartym, tj. u wolontariuszy — pracowników uniwersytetu lub studentów, niczym nie ustępowały badaniom prowadzonym w systemie zamkniętym (np. u żołnierzy).
Podobnie, jak ... czytaj dalej
Metodologia
Wysokie koszty, czas i pracochłonność badań nad biologicznym wykorzystaniem białka u ludzi, a także względy natury etycznej, są powodem, że badania tego typu są wykonywane rzadko. Jedynie w ostatecznych przypadkach, gdy nowego typu produkty mają zostać wprowadzone na dużą skalę do żywienia ludności, po przeprowadzeniu wstępnych badań wszystkimi dostępnymi metodami, produkt powinien być poddany badaniom ściśle kontrolowanym na odpowiednio dobranej grupie ludzi, zanim zostanie wprowadzony do żywienia na skalę masową.
Na ogół wyniki badań na zwierzętach laboratoryjnych lub nawet na mikroorganizmach są przenoszone na człowieka. Należy podkreślić, że w przypadku podejmowania badań na grupie ludzi, są pożądane równolegle prowadzone badania na zwierzętach laboratoryjnych, w odpowiednio dobranych warunkach. Nagromadzenie wyników z równolegle prowadzonych badań pozwoli na bardziej precyzyjne spojrzenie na relację uzyskanych danych. W przeciwieństwie do zwierząt, gdzie metodami wyboru są na ogół metody wzrostowe, u człowieka jedyną metodą jest bilans azotowy stosowany od lat, zarówno do badań nad zapotrzebowaniem na białko i aminokwasy, jak i do badań biologicznej oceny białek, opartych na tej samej zasadzie: przydatności ich do syntezy białek ustrojowych. Metodyce prowadzenia badań poświęcono szereg wyczerpujących publikacji: Komitetu do Spraw Niedoborów Białka (NAS 1959, 1963), Kofranyi ... czytaj dalej
Próby ustalenia składu aminokwasów białka wzorcowego
Liczbowo określone zapotrzebowanie na aminokwasy daje podstawy do opracowania białka wzorcowego (amino acid pattern), które powinno być spożywane przez człowieka.
Osiągnięcie składu aminokwasów mieszaniny białek produktów wchodzących w różnych kompozycjach do przeciętnych racji pokarmowych różnych grup ludności w różnych krajach, zwłaszcza tam gdzie istnieją niedobory białka analogiczne do zawartości ich w białku wzorcowym, stanowi gwarancję pokrycia zapotrzebowania na aminokwasy. W tablicy 11 przedstawiono wzajemny stosunek zapotrzebowania na aminokwasy egzogenne zależnie od wieku.
Zapotrzebowanie na azot i białko (N X 6,25) w przeliczeniu na 1 kg masy ciała po osiągnięciu dojrzałości płciowej spada trzykrotnie w stosunku do zapotrzebowania w pierwszym roku życia. Natomiast zapotrzebowanie na poszczególne aminokwasy spada u dorosłych do % lub V10 wysokości zapotrzebowania u niemowląt. Według Komisji Żywności i Żywienia NAS (FNB) spadek ten jest prawdopodobnie przesadzony, z uwagi na to, że jak powiedziano wyżej, minimalne zapotrzebowanie na aminokwasy «Jla dorosłych jest ocenione zbyt nisko. Na podstawie dostępnych danych nie można określić spadku zapotrzebowania na poszczególne aminokwasy wraz z wiekiem, gdyż jest on bardzo nierównomierny.
Biorąc pod uwagę rolę poszczególnych aminokwasów egzogennych w organizmie, a także różne proporcje aminokwasów wchodzących ... czytaj dalej
Zapotrzebowanie na aminokwasy
W praktycznym żywieniu aminokwasy są spożywane za pośrednictwem białka. Poznanie ilościowego zapotrzebowania na poszczególne aminokwasy, egzogenne dostarcza niezbędnych informacji dla:
a) opracowania prawidłowych założeń dla produkcji (lub
zaopatrzenia) żywności, zwłaszcza w przypadku ograniczonych możliwości produkcji drogiego białka zwierzęcego,
b) optymalizacji składu mieszanek do całkowitego sztucznego żywienia niemowląt (preparaty. zastępujące mleko matki),
c) opracowania składu mieszanek aminokwasów syntetycznych lub hydrolizatów białka do żywienia parenteralnego lub żywienia sondą ludzi chorych,
d) optymalizacji składu posiłków, gotowych dań lub nawet całodziennych racji pokarmowych produkowanych przemysłowo,
e) zastosowania kompozycji tańszych preparatów białka roślinnego, zastępujących drogie białko zwierzęce w produkcji żywności.
Biorąc pod uwagę tak ważne cele utylitarne, Komisja Ekspertów FAO 1957 oraz FAO/WHO 1965, 1973 opracowały kolejne, doskonalone w miarę gromadzenia badań, propozycje składu aminokwasów białka wzorcowego, najbardziej zbliżone do zapotrzebowania na aminokwasy przez człowieka.
Porównanie zawartości aminokwasów przypadających na 1 g białka w opracowywanych kompozycjach żywności dla różnych celów wymienionych wyżej, ze składem białka wzorcowego powinno stanowić ... czytaj dalej
Propozycje zastosowania wyższego marginesu bezpieczeństwa przy ustalaniu norm na białko
Na podstawie powyższych uwag i komentarzy wydaje się, że w krajach wolnych od fizjologicznych objawów niedoborów białka, gdzie istnieją ekonomiczne możliwości zaopatrzenia ludności wystarczające ilości produktów spożywczych bogatych w białko, można przyjąć wyższy niż 30-procentowy margines bezpieczeństwa.
W II części tablicy 8 przedstawiono wartości zapotrzebowania na azot i białko pełnowartościowe po dodaniu 100-procentowego marginesu bezpieczeństwa do zapo-h chowania minimalnego. Podobnie, w tablicy 9 podano wartości średnie dla grup wieku i stanu fizjologicznego, po uwzględnieniu 100-procentowego marginesu bezpieczeństwa. Wychodząc z założenia, że wg Kunachowicz i wsp. (1977) średni współczynnik wykorzystania białka mieszaniny produktów spożywczych, odpowiadający wysokości spożycia żywności przez ;ne grupy ludności Polski (w 1973 r.) wynosi 70%, w kolumnach 6 i 6a przedstawiono pożądaną wysokość spożycia białka dla warunków naszego kraju. Przyjęty wyższy, niż ustalony przez Komisję Ekspertów FAO/WHO, margines bezpieczeństwa, nosi obawy, że zalecenia spożycia białka dla dzieci i młodzieży oraz kobiet w okresie ciąży i laktacji, mogą być niewystarczające. Natomiast wydaje się, że 100-procentowy margines bezpieczeństwa jest zbyt wysoki dla dorosłych mężczyzn i kobiet w okresie równowagi azotowej. Dla tych grup wydaje się, że wystarczającym marginesem bezpieczeństwa ... czytaj dalej
Uwagi krytyczne
Komisja Specjalistów Amerykańskiej Akademii Nauk (Food and Nutrition Board cyt. wg Williamsa i wsp. 1974) przeprowadziła rewizję dotychczasowych danych dotyczących ilościowego określenia strat azotu endogennego u ludzi, wyrażając opinię, że dane le są stosunkowo wnikliwie opracowane. Podkreśliła jednak, że ze względów technicznych określenie strat endogennych azotu jest wykonywane przy zastosowaniu diety bezbiałkowej, przy której są uruchomiane mechanizmy fizjologiczne przystosowujące do bardziej oszczędnej wewnątrzustrojowej gospodarki aminokwasami.
Jak widać z wykresu strat azotu endogennego w moczu, w ciągu pierwszych kilku dni straty te są wyższe, a następnie ustalają się na pewnym niskim poziomie. Poziom ten jako średnia wartość pomiędzy 10 a 14 dniem stosowania diety bezbiałkowej, został umownie przyjęty jako nieuniknione straty azotu endogennego w moczu; mogą być one jednak wyrazem przystosowania się do braku białka w diecie. Niezbędne są zatem badania określające dynamikę strat przy różnej wysokości spożycia azotu. Podobne zastrzeżenia można mieć do techniki określenia metabolicznych strat azotu w kale. Straty te mierzone na diecie bezbiałkowej mogą być różne niż przy normalnym odżywianiu, gdy w racji pokarmowej znajduje się białko i szereg substancji drażniących przewód pokarmowy. W warunkach normalnego spożycia, białka nie sposób odróżnić azot nie strawionych części ... czytaj dalej
Współczynnik wykorzystania białka lokalnych diet
W celu wyrażenia wysokości zapotrzebowania w postaci białka lokalnych diet o różnym składzie, jest niezbędna znajomość współczynnika jego wykorzystania.
Ze względu na brak danych z badań na grupach ludzi, Komisja Specjalistów FAO/WHO 1973 zaleca zastosowanie tzw.względnego współczynnika wykorzystania białka z badań na szczurach. Współczynnik ten, uzyskany doświadczalnie przy zastosowaniu mieszaniny produktów dostarczających białko, odpowiadającej przeciętnemu spożyciu przez odpowiednie grupy ludności, wyraża się w procentach w stosunku do równolegle prowadzonej grupy kontrolnych zwierząt otrzymujących białko pełnowartościowe mleka lub całego jaja kurzego w identycznych warunkach doświadczalnych.
W tablicy 9 podano wartości wyrażone w g białka na kg masy ciała w obrębie grup wg wieku, przeliczone na całkowite dobowe zapotrzebowanie, posługując się średnią masą ciała, cha-i akierystyczną dla danej grupy. W kolumnach 3 i 3a zapotrzebowanie wyrażone w g białka pełnowartościowego z 30-procen-Lowym marginesem; w kolumnach 5 i 5a, wyrażone w g białka racji pokarmowych o 70-procentowym współczynniku — wykorzystania, charakterystycznym dla naszych warunków odżywiania. ... czytaj dalej
Rozpiętość wysokości marginesów bezpieczeństwa przy ustalaniu wysokości zapotrzebowania na białko
Niecałkowite wykorzystanie białka pełnowartościowego
Przyjąwszy opisane powyżej założenia, Komisja Specjalistów FAO i WHO zaproponowała dodatkowo podwyższenie o 30% wartości średnich strat azotu i potrzeb dla syntezy białka, w okresie wzrastania, ciąży i laktacji. Dodatek tein jest niezbędny ze względu na fakt, że nawet najlepsze białka, takie jak mleka czy całego jaja kurzego, nie są wykorzystywane bez strat. Zastosowano go w przypadku wszystkich grup ludzi według wieku, z wyjątkiem niemowląt od urodzenia do 6 miesięcy, u których zapotrzebowanie na białko zostało zbadane przy żywieniu białkiem mleka kobiecego.
Zmienność osobnicza w stosunku do zapotrzebowania na białko
Zaproponowano również zwiększenie zapotrzebowania na białko o dalsze 30% w celu uwzględnienia zmienności indywidualnej, jako marginesu bezpieczeństwa, dającego pewność pokrycia zapotrzebowania całej populacji. Tak obliczone dane podstawowe zestawiono w tablicy 8 w kolumnach 1, 2, 3 4a. W celu wyrażenia zapotrzebowania na białko pełnowartościowe, wartości wyrażone w mg azotu przeliczono na białko, przy zastosowaniu współczynnika 8,25, co podano w kolumnie 4b. ... czytaj dalej