Analiza zawartości aminokwasów w białkach produktów żywnościowych
Ujmując historycznie rozwój metod analizy aminokwasów w zastosowaniu do oceny wartości produktów spożywczych, należy w pierwszym rzędzie podkreślić wprowadzenie metod mikrobiologicznych do ilościowego oznaczania aminokwasów w latach czterdziestych przez Wooda, Snella i Barton-Wrighta (cyt. wg Kavanagh 1963).
Podobnie, zastosowanie chromatografii bibułowej pozwalało śledzić pełne spektrum aminokwasów (cyt. wg Leggett Bai-ley 1967). Muszkatowa (1963) stosowała chromatografię bibułową do badań nad zawartością aminokwasów w produktach spożywczych. Często jednak aminokwasy, najważniejsze z punktu widzenia żywieniowego, były najtrudniejsze do rozdzielenia
rażenia ilościowego. Rozdział aminokwasów na bibule odebrał jednak dużą rolę w zakresie ich analizy jakościowej i w tym też zakresie ma do dziś duże znaczenie.
Największe znaczenie w analizie ilościowej składu aminokwasowego znalazła jednak metoda jonowymiennej chromatografu kolumnowej, opracowana w latach pięćdziesiątych przez Ioore’a, Steina i Spackmana (Moore i wsp. 1951, 1954 a, b, 1958, 1963). Zasadą metody jest chromatograficzne rozdzielenie amino-kwasów przy użyciu żywicy jonowymiennej po uprzedniej hydrolizie białka, a następnie kolorymetryczne oznaczenie barwnych związków, powstałych w wyniku reakcji aminokwasów z ninhydryną.
Oznaczenie składu aminokwasowego białka przebiega za-:em dwuetapowo. W pierwszym etapie przeprowadza się hydrolizę białka do aminokwasów. W drugim etapie dokonuje się rozdziału mieszaniny aminokwasów na kolumnie wypełnionej kationitem. Druga część analizy jest prowadzona na ogół przy zastosowaniu automatycznego analizatora aminokwasów. Współcześnie metoda Moore’a i wsp. należy do najbardziej popularnych i podlega ciągłym usprawnieniom. Użycie nowych rodzajów żywic, bardziej odpowiednich buforów, a także zastosowanie zwiększonego ciśnienia przepływu buforów pozwala na skracanie czasu analizy i zwiększanie jej dokładności. Stąd wynika stały postęp w opracowywaniu i produkcji nowych zautomatyzowanych analizatorów aminokwasów (Niederwieser i Pa-taki 1971).
Rozważając metody ilościowej analizy aminokwasów podano poniżej te, które uznano dotąd za najprostsze, a jednocześnie najbardziej dokładne i powtarzalne, dlatego najbardziej polecane. Alternatywne są metody chromatografii gazowo-cieczowej (GLC), nad którymi aktualnie są prowadzone prace w celu ustalenia technik badawczych (Kubacka i wsp. 1975, Niederwieser i wsp. 1971, Okuniewska i wsp. 1971).